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PNGase F
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产品信息（Product Details）
| 产品英文名（Product Name） | PNGase F |
| 产品中文名 | 肽N-糖苷酶 |
| CAS NO | 83534-39-8 |
| 产品描述（Description） |
肽N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶，主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。PNGase F可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖，及杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。
PNGase F 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。 |
| 储存条件（Storage） | 储存于 -20°C，保质期 12 个月。 |
| 运输方式（Shipping） | 蓝冰运输 |
| 状态（Form） | Liquid |
| 储存溶液（Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol |
| 表达宿主（Host） | E. coli |
| 分子量 | 36kDa |
| 纯度 | >95% as determined by SDS-PAGE |
| 比活性 | 1,800,000 U/mg |
| 酶活单位定义 | 1个酶活力单位指在10ul的反应体系中，37℃条件下1小时从10ug变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量定义为一个活性单位（U）。 |
| 酶切反应条件 | 37℃ ，酶切反应1h，每1ug酶可以酶切10ug底物。 |
| Note | For research use only . |
实验示例（Experiment Example）
使用方法（Standard Operating Procedure）
1. 在变性条件下进行SDS-PAGE的蛋白质去糖基化
(1) 在水中加入50μg目标糖蛋白（或低离子强度的相容缓冲液）至最终体积为12μl。
(2) 加入1μl 的5％SDS。
(3) 加入1μl的 1MDTT。
(4) 在95℃加热5min使样品变性。
(5) 在室温下冷却5min。
(6) 加入2μl的0.5M磷酸钠缓冲液（pH 7.5）。如果pH在PNGase F（pH 6-10）范围内，可以使用其他缓冲液。
(7) 加入2μl的10％NP-40。可用Triton X-100替代NP-40。
(8) 加入2μl的PNGase F.
(9) 在37°C孵育1-3h。
注意：糖蛋白的去糖基化可以通过SDS-PAGE上的凝胶移位来观察，去糖基化的产物比糖基化的底物移动的更快。
2. 在非变性条件下进行质谱检测的蛋白质去糖基化
(1) 在50mM碳酸氢铵（pH 7.8）中加入20μg的糖蛋白至终体积为18μl。
(2) 加入2μl的PNGase F.
(3) 在37°C孵育2-18h。
注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。