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无细胞蛋白表达与纯化服务
服务简介
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无细胞蛋白表达系统又称为体外翻译系统。无细胞蛋白质合成体系是以外源目的mRNA或DNA为模板,在细胞抽提物的酶系中通过人工添加蛋白质合成所需的底物和能量,合成目的蛋白质的体外蛋白合成系统。无细胞蛋白表达系统模拟生物细胞的生命现象,重现胞内蛋白转录翻译过程,它需要包含蛋白质合成过程中所必需的各种原料、能量、转录因子和翻译因子等。

该系统尤其适于膜蛋白和毒性蛋白的表达,同时具有周期短、通量高的特点。自建立该平台以来,已成功制备400多种蛋白,其中包含300多种传统大肠杆菌表达系统难以表达的1-15次跨膜蛋白和毒性蛋白,其中含有分子量高达130kDa-140kDa的多次跨膜蛋白。

 

系统优势

  1. 不受细胞结构限制,可以表达对宿主细胞有毒的外源蛋白质;
  2. 高通量,可以在多孔板上在各种不同条件下同时表达几种不同的蛋白,适用于高通量蛋白质组学研究;
  3. 开放式反应系统使反应条件易于更改,有助于调节基因转录、蛋白质合成和后翻译修饰;
  4. 允许添加非天然氨基酸或同位素标记的氨基酸来合成特殊用途的蛋白质;
  5. 步骤少,实验过程简单,对设备依赖性较低。

 

服务优势

  1. 超高性价比,低至5500元起;
  2. 货期短,20-25个工作日内即可交付;
  3. 产量高,部分蛋白可以达到5mg/mL。
服务内容
步骤 服务项目 服务说明 特色 周期
1 质粒构建及制备
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密码子优化、全基因合成 多载体优化
为了得到最高的表达量并且最低的序列修饰,除常规N端融合表达蛋白外,我们还提供N端短肽优化表达服务。N端短肽包含6-11个氨基酸,可提高mRNA翻译效率,从而提高蛋白产量。
6-9个工作日
PCR扩增产物通过酶切连接到pET系列载体上
重组质粒大量制备
2 小试表达及优化
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多载体多反应条件优化,SDS-PAGE电泳检测,以确定最优反应条件 多条件表达方案
无细胞表达能在多孔板上按照多种不同的条件,多种不同的蛋白同时平行进行。我们提供多条件优化表达服务。
5-7工作日
3 目标蛋白表达及纯化
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根据小量结果提供1-10ml放大体系表达 多条件纯化方案(可选)
针对膜蛋白,我们提供不同去垢剂纯化服务,以确保您的膜蛋白适合的最佳缓冲。活性膜蛋白最适合采用该优化方案。
6-9工作日
通过亲和、离子交换及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白
4 其他(可选)
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收费:通过酶切去除标签 灵活的附加服务(可选)
提供多种附加服务,客户可根据实验需求灵活选择
3个工 作日
免费:可提供无菌操作、内毒素去除和冻干等服务(备注:冻干与无菌操作不可同时满足) 2个 工作日
5 质控
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进行浓度、纯度等检查,并提供QC报告 详细的质控报告
为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告
3-5工 作日
总时间 20-30工作日
服务特色

 

特色技术平台

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去垢剂技术平台

去污剂是同时具有亲水极性基团和疏水非极性基团的双极性分子,能够使脂膜解体释放膜蛋白,并在溶液中为去膜状态下的膜蛋白提供疏水环境,维持膜蛋白的疏水跨膜结构。

天德生物搭建了基于无细胞表达的去垢剂技术平台。通过体外添加DNA模板、ATP、氨基酸、各种底物、细胞抽提物的酶等合成蛋白质,筛选不同去垢剂来提取目的蛋白,可很好溶解纯化跨膜蛋白,帮助其在溶液中形成天然正确构象。

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Nanodisc技术平台

在含有去垢剂的缓冲液中,大部分膜蛋白可以维持稳定性和活性。但少数对去垢剂敏感的膜蛋白是不适宜含有去垢剂的缓冲条件的,具体表现为无法纯化,稳定性不好和没有活性。

天德生物搭建了基于无细胞表达的Nanodisc技术平台。通过体外添加MSP,磷脂分子使其在反应过程中边表达边组装成Nanodisc结构,保持其生物学活性并有很好的水溶性。

 

QA/QC

无风险定制,不成功不收费

注:该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质,我们将按步骤收费。