Tanda^®405S SE 标记试剂盒

Tanda^® Microscale Protein Labeling Kit

产品货号：TDLK23004

产品规格：S, M, L

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产品内容
 

染料信息
 

储存条件

4℃保存，有效期见外包装。

Tanda^®标记试剂盒包含您需要的本公司 Tanda^® 染料或生物素（Biotin）迅速标记抗体的所有组分。标记过程只需将抗体和染料简单混合于试剂盒内提供的反应缓冲溶液中，进行短时间的孵育即可。标记后，约4–6分子染料与1分子抗体共价结合。Tanda®是共价标记，用它标记的抗体可以用于多色荧光染色，而不发生抗体间的染料转移。

Tanda^® 标记可以兼容NaN3、低浓度的甘油、Tris 和甘氨酸。试剂盒里提供的微型超滤离心管可以在标记前快速去除不兼容的小分子抗体稳定剂。

标准Tanda^®标记步骤可以用于低于IgG(μg)4倍的BSA或明胶样品。根据您希望标记的IgG量来选择试剂盒大小。优化标记步骤适用于稳定蛋白质过多或腹水的IgG样品。在这种情况下，根据需要标记抗体样本的蛋白质总量（IgG +稳定剂，或腹水中总蛋白量）来选择试剂盒大小。优化步骤也可用于标记IgG量低于最低范围的样品，通过添加稳定剂蛋白使总蛋白量达到试剂盒的标记范围。优化步骤不建议用于标记抗血清或杂交瘤细胞培养上清， 因为这些样本的抗体含量相对于总蛋白非常低。

当用荧光标记抗体直接进行免疫荧光时，您可能需要使用更多的抗体来实现间接免疫荧光法检测（一抗加标记二抗）染色的强度。在我们的测试中发现，间接免疫荧光染色结果是直接免疫荧光染色信号的三倍左右。

酶标二抗仍可以识别使用 Tanda^®试剂盒标记的一抗上，因此当多个来自同一物种的抗体用于多色免疫荧光染色法时，二抗无法区分同一物种来源的未标记一抗和使用 Tanda®试剂盒标记的一抗。Tanda®标记抗体可以用作传统间接免疫荧光法检测后的三级染色。我们还提供生物素 Tanda®标记试剂盒、酶标记和荧光蛋白标记的Tanda®试剂盒。

Tanda^®优化标记步骤

1． 蛋白、IgG浓度1-5mg/mL是较合适的标记浓度，如果需要，用PBS溶解或稀释。确保蛋白的μg量匹配试剂盒的标记范围，如果待标记的IgG少于试剂盒的最低标记量，加入BSA使BSA和IgG的蛋白总量适配试剂盒。

2． 将组分B用1 mL蒸馏水充分溶解，使成为10 ×反应缓冲液。

3．以 1:10 的比例混合组分B与抗体溶液，使溶液最终形成 1×反应缓冲体系（例如9μL的抗体加1 μL 组分B）。移液器上下吹吸混合。

4．将上步的溶液全部转移至Tanda^®染料瓶中，这里不需要计算瓶中染料的含量，涡旋几秒钟。

5．室温避光孵育30min，最好每10min涡旋1次，使染料和蛋白充分接触反应。

6．反应过程中组装纯化柱，如下图所示。将纯化填料混匀吸入柱腔中，放出保护液，直至柱床体积在1mL左右。

7．将反应后的标记共轭物靠重力流经纯化柱，收集流穿液（大概40 μL每滴）。根据自己加入共轭物的体积来决定收集量。可以适当多收集流穿液做后续超滤。

8．如果标记物分子量在20 kDa以上，则可以选择直接用之前的超滤管浓缩染料-蛋白共轭物。

9．染料-蛋白共轭物浓度的确定可通过以下公式计算：

C(mg/mL) = {[A280 -(Amax× Cf)]/1.4} ×稀释因子

a．C 是指染料-蛋白共轭物浓度；

b．稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数；

c．A280和 Amax分别是指在280 nm处的吸光度以及在吸收波长处的吸光度； 

d．Cf是校正因子；

10．将标记蛋白储存在2-8℃避光。如果纯化蛋白偶联物的最终浓度小于1 mg/mL，则加入适量BSA或其他稳定蛋白。在2 mM叠氮化钠的存在下，共轭物应在2–8℃下稳定几个月。为了更长的存储，将共轭物分成小等分，在≤ -20℃冷冻。避免反复冻融，避光保存。